【佳学基因检测】遗传性癌症植入前基因检测面临的实际挑战

许多研究人员已经对遗传性癌症病例使用PGT技术相关的实际问题进行了研究。直接和间接方法是分析单基因疾病的两种广泛使用的方法。直接方法是首选方法，包括对小的缺失、添加或重复进行片段分析，而小测序用于点突变。然而，间接方法使用了一组与待检测基因相关的短串联重复序列（STR）标记，但它需要家族中的两个受影响个体来确定与疾病相关的单倍型。此外，这些方法的适用性因具体突变而异。

例如，重复或大缺失突变无法通过常规PCR进行鉴定，需要其他技术，如多重连接依赖性探针扩增（MLPA）或Southern印迹分析。尽管如此，这两种方法都有局限性，例如需要大量的DNA，并且不适合分析单细胞样本。当通过片段分析无法检测到致病性变体时，必须通过对极体I与极体II进行分析或通过精子评估来鉴定单倍型。然而，使用多重PCR分析STR标记的标准间接方案需要在基因两侧至少有两个信息丰富的STR才能准确检测染色体重组事件，这会使方案更加复杂和耗时。因此，根据现有突变的性质，通常对每对使用一种特殊的方案。

最近的指南，如ESHRE的2020年PGT-M良好实践建议，提供了PGT-M最佳实践的全面概述。这些指南强调了分析基因侧翼区域两侧的重要性，以检测重组，并将误诊风险降至最低，因为仅依赖一侧可能导致未检测到的重组事件。此外，指南建议使用几个PCR重复来识别任何ADO或扩增功效问题，因为两者都可能因被分析的细胞而异。例如，在D11S1298标记中，ADO在PGT前研究中为20%，但在PGT周期中为0%，而在D11S1313基因型中，在PGT前研究中扩增效率约为70%，但在PGT周期中扩增效率为90%。

第二种方法是间接方法，当受影响的家庭成员不可用时，必须通过对极体I与极体II或精子进行分析来确定单倍型。在这些情况下，由于无法检测特定的变体，可能不知道与所确定的单倍型相关的确切风险。然而，重要的是要注意，即使在无法准确确定风险的情况下，间接PGT的使用仍然可以提供有价值的信息，有助于指导临床决策。例如，在识别出高风险单倍型的情况下，这些信息可用于告知患者继续妊娠的潜在风险和益处。在某些情况下，尽管存在已知的风险，患者可能会选择继续妊娠，而在其他情况下，他们可能会选择探索其他选择，如捐赠卵子或收养。
 

在确定了低风险单倍型的情况下，这些信息可以为患者提供保证，并有助于缓解人们对遗传疾病可能遗传给后代的担忧。

然而，在某些情况下，如Bautista Llacer等人提到的情况，间接方法不适用，因为聚合酶链式反应无法检测致病性变体。间接方法是执行该技术的标准PGT方法，因为相同的多重聚合酶链式反应包括可用于其他父母或家庭的相同微卫星标记。

然而，当在所有情况下都需要至少两个信息性STR时，很难创建多重PCR。此外，STR需要位于基因两侧的侧翼区域，以检测染色体中的重组事件。

因此，标准间接协议是特设协议。已经为每一对制定了一个特殊的方案，它取决于现有致病性变体的性质。总体而言，虽然使用间接PGT方法可能无法提供与特定遗传变体相关的潜在风险的完整情况，它仍然可以提供有价值的信息，帮助指导决策，并告知患者他们的计划生育选择。临床医生必须仔细考虑每个病例的具体情况，并使用适当的检测和分析方法，以确保提供的信息准确可靠。

Bautista Llacer等人进行了荧光多重半巢式聚合酶链式反应，以鉴定携带致病性变体的单倍型，他们还表明，多重聚合酶链式反应的使用是检测样本污染、等位基因缺失或染色体重组的可靠方法。

诊断不应仅基于基因侧翼区域一侧的STR标记，因为可能无法检测到重组，并可能发生误诊。

Kakourou等人进一步研究并描述了一个STR标记与待研究基因之间的重组

PGT-M可用于已明确确定致病变体的单基因疾病。这些基因座是核基因座（X连锁、常染色体显性或隐性遗传）或线粒体基因座（母系遗传），涉及致病性种系遗传变异。

阿齐姆等人指出，在体外受精过程中进行卵巢刺激以获得更多的卵母细胞可能会增加雌二醇的浓度，这在理论上可能会增加BC复发的风险。因此，来曲唑已被用于抑制体外受精过程中的雌二醇，并已被证明是有效的。然而，值得注意的是，许多病例报告表明，接受试管婴儿治疗的患者和未接受试管婴儿的患者的BC复发率相似。此外，对患者和健康对照进行的比较研究表明，在不使用来曲唑的情况下，试管婴儿治疗并没有增加BRCA基因致病性变异引起的BC复发率。ESHRE指南还建议在某些情况下对胚胎进行癌症易感性基因检测，包括当一方或双方伴侣是癌症易感性基因携带者或有癌症家族史时。

总体而言，将ESHRE指南纳入PGT-M实践可以帮助解决遗传性癌症病例在应用该技术时面临的许多实际问题。这些指南推荐了可以导致准确诊断、降低误诊风险和提高技术疗效的最佳实践。