【佳学基因检测】无丙型球蛋白血症非布鲁顿型基因筛查怎么做才会准确？

无丙型球蛋白血症非布鲁顿型又叫做常染色体隐性遗传无丙型球蛋白血症。致病基因鉴定基因解码基因检测区别于常规的基因检测的不同点在于佳学基因的基因解码技术总是能够对采用数据库比对无法鉴定的病因找到产生临床观察到的疾病的新基因突变。最近描述的常染色体隐性遗传的先天性无丙种球蛋白症中，ZIP7缺乏症是新增加的致病基因。根据基因解码，ZIP7由SLC39A7基因编码，是一种内质网到细胞质的Zn2+转运蛋白。正在发育的B细胞对改变的Zn2+分布敏感，这导致了超过前B细胞阶段的发育阻碍。在细胞系中ZIP7的完全丧失会导致细胞质Zn2+的减少和内质网Zn2+浓度的增加。这一致病基因通过基因解码报道第一个病例，基因检测数据库没有收录过其他ZIP7缺乏症的病例。在此，佳学基因检测描述了一个因反复呼吸道感染、脑膜炎、无丙种球蛋白症和B细胞淋巴细胞减少而接受评估的患者，最终发现其携带有一个新的SLC39A7基因突变。佳学基因检液血液科疾病数据库描述了他的临床特征、免疫学发现和遗传学调查。

患者和他的家庭成员在佳学基因国际病例分享机构接受了临床观察、检查、治疗和监测。经过知情同意在电子注册系统获取了病历。患者的母亲已经书面同意进行研究并发布数据。所有程序均按照机构研究委员会的道德标准执行。从患者及其家庭成员中提取基因组DNA，并对患者进行全外显子测序（WES），对患者和可获得的家庭成员进行目标基因测序。WES是使用Illumina HiSeq 2500测序系统（Illumina）进行的。按仪器生成机构的说明，使用SureSelect人类全外显子试剂盒（Agilent）进行外显子捕获。通过在患者和家庭成员中进行双脱氧链终止桑格测序来验证WES发现的可能的疾病等位基因。通过PCR扩增SLC39A7的外显子和邻近的内含子区域。使用Big Dye Terminator循环测序试剂盒（Applied Biosystems）对扩增子进行测序，使用ABI 3130毛细管测序仪（Applied Biosystems）分析目标区域。通过与适当的GenBank参考序列进行比较，确定序列变异的位置。

这位患者，一个14岁的男孩，是一个来自北京效区的非近亲结婚第一个孩子，足月出生。出生体重和长度在正常范围内，新生儿适应期无病例发生。家庭中未报告近亲结婚。患者出生时只接种了BCG疫苗，左肩有一个小疤痕显示接种的痕迹。使用头孢曲松50 mg/kg/天治疗10天，4岁时肺炎的临床和放射学恢复。他被怀疑有免疫缺陷，但家庭未能赴约进行免疫学评估。7岁时，他发展出了脑膜炎，但脑脊液中并未分离出病原微生物，这可能是由于之前已经开始了头孢菌素类抗生素治疗的原因。经过两周的三代头孢菌素静脉注射治疗后，他出院了，但是继续发展出反复的上呼吸道感染，主要由家庭儿科医生进行治疗。9岁时，他发展出了肺炎，并接受了静脉注射抗生素、吸入性大黄霉素（多粘菌素E），并发展出肺炎和抗真菌治疗，因为C. albicans也从气管吸出物中分离出来。作为治疗的一部分，还进行了多次硬支气管镜灌洗。他的家族史对原发性免疫缺陷和血液疾病均为阴性。他的母亲和其他家庭成员；他的父亲在33岁时死于车祸。

患者的白细胞、红细胞和血小板总数均正常，但存在低色素性贫血、中性粒细胞减少症和CD19+ B细胞淋巴细胞减少症（表1）。CD8+ T细胞计数升高，导致CD4+/CD8+比例倒置，但CD4+细胞数量正常，HIV PCR检测结果为阴性。免疫化学测试显示无丙种球蛋白症，并且缺少针对白喉毒素、H. influenzae型B和肺炎链球菌的病原特异性抗体（表1）。补体成分C3和C4的浓度正常，甲状腺激素测量显示fT3和fT4的水平正常。Quantiferon-TB测试结果为阴性。

基于这些发现，开始进行每月一次的静脉注射免疫球蛋白（IVIG）治疗。根据国际免疫学会专家委员会最近更新的免疫缺陷（IEI）相关基因分类，对患者进行了相关基因分析。通过全外显子测序（WES）的突变筛查，发现患者在SLC39A7基因中携带一个特有的纯合变异。该变异被预测为有害（CADD得分：27.1）。通过WES未能在其他IEI相关基因中鉴定出其他致病变异。通过目标基因测序验证了SLC39A7序列变异，佳学基因致病基因鉴定基因解码的检测结果患者是纯合型，而他的母亲和三个兄弟姐妹都是SLC39A7基因中c.1051A>G，p. Thr351Ala突变的杂合型（图2）。也检查了全外显子测序文件中的其他纯合区域，发现近亲结婚的百分比低于1%（0.18105%），这表明这个患者并非来自近亲婚姻。

采用基因解码人体疾病及基因型突变注释标记符号体系，佳学基因描述了纯合型SLC39A7基因突变在一名常染色体隐性无丙种球蛋白症患者中的表现。 (A) 家系图示和SLC39A7基因等位基因遗传。全黑色填充的符号表示携带新的纯合型SLC39A7突变的先证者（P）。由黑色和白色组成的符号表示通过目标测序确定的杂合型疾病携带者。对角线条表示疾病个体。用罗马数字（I和II）标明各代，并用阿拉伯数字（从左至右）标明每个个体。所有被指定数字的个体都进行了遗传分析以获得DNA。自动化测序剖面显示先证者（II.3；P）中的纯合型c.1051A>G，p.T351A突变以及四个家庭成员（I.2，II.1，II.2，II.4）中的杂合型突变。 C-控制。 (B) ZIP7的结构域示意图和突变的定位。图示上方和下方的数字表示氨基酸残基的数量。图示下方的数字显示了富含组氨酸的结构域的边界。已识别的SLC39A7变异位点，包括六个错义（P190A，L217P，T351A，E363K，T395I和G458A）和两个无义（Q372X和E451X）突变。新的T351A突变以红色标出。粗体突变在纯合型形式中被观察到。 TM-跨膜；His-组氨酸。

与导致AR和X连锁性无丙种球蛋白症的B细胞发育缺陷（即重排重链和轻链免疫球蛋白基因）类似，SLC39A7的功能缺失可能导致B细胞信号传导受损。 佳学基因在此案例中描述的患者存在无丙种球蛋白症，缺乏B细胞，并且尽管经历了反复的上呼吸道感染，但淋巴结和扁桃体萎缩。临床医师首先考虑到XLA，并寻找BTK突变，但在患者中发现的基因序列是野生型序列，没有突变发生。接下来，佳学基因采用全外显子测序和目标基因测序寻找已知的AR和AD无丙种球蛋白症基因，并在患者的DNA中发现了一个以前未知的c.1051A>G，p. Thr351Ala SLC39A7突变。通过使用所有可用家庭成员的血源性DNA样本，致病基因鉴定基因解码证实了患者中这个SLC39A7突变的纯合性，以及在临床健康的家庭成员中的杂合性。编码锌转运蛋白ZIP7的基因已被揭示为导致中国人中的常染色体隐性无丙种球蛋白症。就我们所知，这里报告的患者是基因检测数据库中的患有遗传性ZIP7缺乏症的患者。